極性改性反相色譜柱使用過程中不能碰撞、彎曲或強烈震動。當柱子和色譜儀連結時,閥件或管路一定要清洗干凈。以下從流動相、樣品、保護柱等方面提出色譜柱維護應注意的一些問題。
(1)流動相:流動相使用前必須經脫氣和過濾處理。即使儀器配有自動脫氣機,也采用超聲脫氣或其它簡便的脫氣方法對流動相進行預脫氣。盡量避免使用高粘度溶劑(如異丙醇)作為流動相,避免流動相組成及極性的劇烈變化。流動相應盡量使用色譜純,減少流動相中雜質對色譜柱的污染和對檢測器的影響。水用超純水,流動相用0.45μm或0.22μm的膜過濾。大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2～7.5,硅膠柱pH>8時會發生硅膠溶脫,鍵合型柱pH<2時會發生鍵合相斷裂,流動相盡量不超過色譜柱的pH范圍。普通C18柱盡量避免在40℃以上的溫度下分析。柱內不溶物容易引起色譜柱的堵塞,影響樣品的分離。不溶物產生的原因是有溶劑的不互溶、樣品溶解液和流動相不互溶或者由于溫度改變或固定相干涸而產生沉淀。為避免上述問題,要注意溶劑之間的互溶性。若兩種溶劑不互溶,需經過中間溶劑慢慢過渡。保存時應將色譜柱兩端密封,并盡量保持室溫恒定。
(2)樣品:對內徑5μm的柱子,樣品需經0.45μm的膜過濾,更細的柱子要0.22μm的膜過濾?；w比較復雜的樣品需經過一定的樣品預處理,例如海洋沉積物、中藥提取液、體液等,需要采用萃取等方法除去對柱子有損壞的較大雜質,例如色素、多糖、蛋白質等。盡量減少進樣量,避免過載。
(3)保護柱:使用預柱作為保護柱,減少污染物對分析柱的損傷。壓力升高通常是需要更換預柱的信號。
